10.00 如何提高酶切效率尼?

项目进度

  • 发布需求

    2017-08-20

  • 威客交稿

    2017-09-09

  • 雇主选稿

    2017-09-14

  • 公示期

    2017-09-14

  • 5

    评价

需求描述

大家好, 最近我在做GRA7基因,连接T载体后已测序,目的基因正确插入,现准备酶切后连接表达载体,用BamH1和Sal1酶切,因为目的基因中有两个sal1酶切位点,所以部分酶切,BamH1 37度过夜,Sal1切60分钟,可是条带很弱,试过10*H Buffer和10*K Buffer,已经摸索了半个多月酶切条件,效率仍然很低,请问大神怎样才能提高效率?

精准对接
一等奖

投稿人: 科研扫地僧

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二等奖

投稿人: zhangbaso

请问一下,你只能这两个酶切位选择吗?你第二个酶在目的基因中有两个酶切位点,要是我的话,根本就不会选择这样的酶去切,切出来的条带都是错得。用不了。如果你有其他的酶切位点可以选择,建议你使用其他的酶切位点。一般载体质粒都是具有多克隆位点的吧!

如果你非要坚持使用您的酶切,你要考虑的酶切效率的因素包括酶的浓度,酶切时间,不好酶切的可以过夜酶切。选择最适合该酶的buffer。

有问题可以继续追问。


投稿人: 思雨

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显示 1~3 项 共 3 个投稿

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