10.00 求助关于慢病毒注射问题

项目进度

  • 发布需求

    2017-10-13

  • 2

    威客交稿

    2017-11-02

    距离投稿结束时间剩余

  • 3

    雇主选稿

  • 4

    公示期

  • 5

    评价

需求描述

自带GFP的慢病毒立体定位注射后,可以采用冰冻切片来确定是否注射成功吗?考虑到实验室没有振动切片机,不能做新鲜组织切片,是否可以将立体定位的脑组织直接心脏灌注后OCT包埋冰冻切片直接放置到显微镜下观察?还是需要购买anti-GFP抗体标记然后再拍?

精准对接

投稿人: 韩素娥

可以。心脏灌注后用20%蔗糖脱水过夜,然后OCT包埋进行冰冻切片,切完就可以直接在荧光显微镜下观察,如果病毒滴度高的话可以直接看到绿色荧光,比如高滴度的FUGW空载体一般可以直接看到。


如果是带有目的基因的病毒载体可能滴度不高,你可以也先在荧光显微镜下看看,但一般是看不到,需要染完抗体再看。抗体用 rabbit-GFP 1:1000 Invitrogen 货号A6455,这个抗体相对信号最强。


在体内慢病毒没有AAV表达效果好。这个问题其实就是病毒滴度的问题,高了可以直接看到,不高就染一下抗体,滴度低的染了抗体也可能看不到信号。


投稿人: 思雨

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