10.00 原核蛋白诱导表达后纯化就没有了,是没挂柱吗?

项目进度

  • 发布需求

    2017-12-12

  • 威客交稿

    2018-01-01

  • 雇主选稿

    2018-01-06

  • 公示期

    2018-01-06

  • 5

    评价

需求描述

我使用bl21iptg诱导蛋白表达,分子量11kd,诱导后有明显的目的条带,三次超声裂解后溶于8M尿素,然后过柱纯化。三次超声SDS胶显示蛋白存在于沉淀中,500ml诱导的菌量最后溶于10毫升尿素,10毫升蛋白悬液加入纯化柱后为一次纯化液,然后用8M尿素洗柱为纯化后洗脱,之后再用不同浓度咪唑洗脱,SDS-胶发现蛋白只存在于一次纯化液中,分析可能得原因 1 蛋白没有挂柱,但是纯化的柱子是新的,是否和分子量小有关?还是柱子不好,之前的柱子10ml蛋白液需要一天才能过完,新柱子3小时全部处理完 2 500ml诱导菌最后加10ml尿素溶解,蛋白浓度太低? 请有经验的大神们帮忙分析分析 做了几次都是一加入纯化柱后蛋白就流下来了 不知道跟分子量有无关系?


精准对接
一等奖

投稿人: nkh

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投稿人: 思雨

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显示 1~2 项 共 2 个投稿

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