10.00 RT-PCR合成的引物需要做预实验吗

项目进度

  • 发布需求

    2018-02-06

  • 2

    威客交稿

    2018-02-26

    距离投稿结束时间剩余

  • 3

    雇主选稿

  • 4

    公示期

  • 5

    评价

需求描述

做RT-PCR,让TAKARA合成的引物,需要做预实验吗?可以直接上样品做吗?逆转录的cDNA需要分装保存吗?


精准对接

投稿人: BiomedHKU

附件:

你好,cDNA非常稳定,不需要分装,短时间内做Q-PCR置于4度即可,长时间-20/-80度保存均可。


一个没有用过的primer还是要做一下预试验的,至少看一下PCR出来的产物大小跟你的目的基因片段大小是否一致,有没有其他杂带等。产物跑胶如果有杂带,会干扰你Q-PCR的CT值的,melting curve 会有两个峰值,都是会影响试验数据的。更多问题可以随时微信我,微信二维码见附件

投稿人: yinyuezhou

需要做预实验的,一般引物设计后,只能得到官方的预测数据,而实际的引物质量好坏,还需要做引物的标准曲线,看引物的扩增效率以及引物的特异性;同时对引物的退货温度也需要摸索,不能盲目的相信软件给出的退火温度。

投稿人: 思雨

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投稿人: maolanlan

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显示 1~4 项 共 4 个投稿
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