10.00 扩增启动子失败,是什么情况?

项目进度

  • 发布需求

    2018-05-23

  • 威客交稿

    2018-06-12

  • 雇主选稿

    2018-06-17

  • 公示期

    2018-06-17

  • 5

    评价

需求描述

要求目的启动子片段2000bp左右,扩增后凝胶电泳检测,用DNAmark2000,条带均在最下面,但是扩增不出来是什么原因?另外,启动子最多有2000bp吗?我问一个老师,说不可能有2000,最多200左右。

image.png已经做了很多次实验,排除了很多失败可能,还是不知道为什么,求各位大神解答。

精准对接
一等奖

投稿人: 包子

启动子一般GC含量较高,相对而言是比较难扩增出来的,特别是向您2000 bp的长片段。解决办法有3个方面:


  1. 提高模板DNA的质量,我们实验室一般用天根的基因组提取试剂盒,比较好用。

  2. 改用能扩增高GC含量DNA的DNA聚合酶,TAKARA公司的LA taq酶对应高GC含量的片段扩增效果很好。

  3. 如果还扩增不出来,就重新设计合成引物,我一般用NCBI的引物设计工具,很好用。


另外,关于启动子的大小这个问题,没有固定大小,一般几百bp是启动子的核心区域是驱动基因表达最重要的,但是决定基因特异性表达的光靠核心区域一般不够,一般上游2k都是作为启动子序列的。所以劲量扩增长一点没有坏处。希望能帮到您!

二等奖

投稿人: maolanlan

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投稿人: 禾鸣

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显示 1~3 项 共 3 个投稿

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