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  • CHIP实验问题
  • 江西省南昌市东湖区
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  • 最近开始学习CHIP实验,固定细胞使其蛋白与DNA结合时用37%的甲醛至终浓度为1%,请问甲醛可以用4%的多聚甲醛代替吗,甲醛和多聚甲醛在固定细胞的应用上有什么区别吗?
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  • 蛋白相关问题求教
  • 广东省广州市越秀区
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  •   4天后投稿截止
  • 请教:有什么办法可以单独分离培养上清中的分泌型蛋白,而不含或尽量少含外泌体的?另外一个问题,用ELISA检测培养上清中的某个蛋白成分,测出来的可能会是外泌体中的蛋白么,还是只是测到分泌的游离可溶性蛋白,因为没
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  • 编辑部意见:I can not find that you have a proper identification of the sugar you call aminogalactose. Please determine this in a better way. Secondly, if you consider resubmitting the paper, please give only one digit for the ratios of your monosaccharides, and also determine the linkages you
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  • 组织:小鼠骨骼肌内参:GAPDH 小鼠单克隆抗体该蛋白已经提了有两个月了,提后立即加5×SDS loding buffer煮沸5分钟 之后不用-20摄氏度保存。现在跑内参出现非特异性条带,我的蛋白降解了吗?其他同批次提的蛋白,单克隆抗体 也出
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  • Western问题求助
  • 北京市顺义区仁和地区
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  • 本人拟跑Western,目标蛋白为ALPL(碱性磷酸酶),这个蛋白是本身就是酶,做Western时和其他蛋白好像是有区别的,求大神告知区别和注意事项!
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  • 最近一直在跑Western 没有跑出目的蛋白的条带,用的是lysis buffer 裂解的蛋白。但是我的目的蛋白是属于核内的蛋白,排除抗体原因,是不是我测不出来的问题是因为蛋白提取有问题?是不是要用ripa 来提取?请高手指导一下,谢谢
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  • 抗体说明书上显示的蛋白大小如图所示,蛋白分子量36kDa。而我WB中使用的biostep的marker,显示条带在35kd稍微下面一点,求大神解答,是否显出来的这个条带非目的条带?或者它是目的条带,但是marker显示有误差?
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  • 一直在做支原体菌体破碎后悬液OD260/OD280的测定,原来一直是在1.2-1.3之间,可最近有一批突然变到1.5了,请教各位大神是怎么回事啊???SDS-PAGE显示蛋白成分没有变化。
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  • 最近在做Western Blot时遇到了白膜问题,希望各位前辈、战友能不吝赐教我的目的蛋白是BRCA1,预测分子量220KD,说明书上的样图实际分子量在250KD以上(换了三次抗体,三支抗体说明书都是这样标注的)全蛋白裂解、核蛋白裂解、
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  • 做了将2个月的WB,从第一次做我的所有条带都已经可以做出来了,而且每次的内参条带都不齐,目的蛋白也是看不出药效,不管是按BCA测蛋白浓度,还是按内参的灰度调整上样,或者是按照统一标准进行收样(六孔板细胞接种量
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  • 第一次做明胶酶谱,实验进行到现在不知道哪里出现问题,背景蓝色,条带也是蓝色,不明白为什么?实验条件:明胶终浓度为1mg/ml,56V进行电泳约60min,120V电泳2h,胶置于100ml洗脱液中,摇床高频震荡1小时,每15分钟更新一次洗
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  • 大家好,感谢肽度这么好的平台,小弟有个小问题,请教下大神,希望能获得满意的答案!问题如下:我现在有两个大小不同的蛋白处于同一个液体环境中。大小分别为22kDa和50kDa。我想用Sephadex G150来分离,有效分离范围是5000~30
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  • 我之前用3XFlag-opb(一个肽段,46个氨基酸)做Pull Down,对照组是转的乱序氨基酸的opb, 然后用Flag-beadsPull down后做考染发现,opb与对照组比,有一条特异性条带,送质谱后发现是一种甲基转移酶蛋白-P5,然后我构建了HA-P5,在细胞内同
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  • 看了一篇外文文献,文章研究的去除特定miRNA的小鼠可以提高多能干细胞到全能干细胞分化潜能,但文章没有说是如何去除的相关miRNA,请问现在想要做miRNA与靶基因的验证实验,去除miRNA都有什么方法。
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  • 载体是pET-28a,原核蛋白。13年表达非常好,保存质粒和菌株。16年上半年重新活化菌株,表达也非常好。最近重新活化菌株,竟然无表达。重新转化质粒,还是无表达!IPTG阳性对照没有问题。感受态BL21阳性对照没有问题质粒双酶切
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  • WB求救
  • 湖北省武汉市东西湖区
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  • LIMK1蛋白,蛋白分子量70kd上样量:50ug电泳:70v,110v 湿转:100v,2h脱脂奶封闭2h一抗:1:800(CST,说明书建议1:1000)GAPDH:1:500(说明书建议1:500)二抗:1:3000内参图:样品图:
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  • 这几张 PPT 里面有两个观点① 信号传递:当信号进入细胞质中后, 会经过信号通路中的一系基因将接 收到的信号逐步传递到下游,最终传递到细胞核中。② 受体激活之后,会使下面的蛋白依次激活: RAS-BRAF-MEK-ERK等,最终将信号传
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  • western问题
  • 江苏省南京市下关区
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  • 390人参与 | 2人投稿
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  • 最近搬了新的实验室,跑western时maker分离的太早,90v电压跑15分钟,maker就分开,之前二十多分钟才慢慢的分开,重复测了tris的PH ,都是对的。条带跑出来还马马虎虎1、电泳液反复重新配过2、丙烯酰胺买的 之前用的好好地3、AP
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