2018年4月份下半月circRNA研究报道汇总

4月下旬发表circRNA文献共计23篇，大部分是研究论文，还发布了一个circRNA疾病相关数据，详解官网历史文章：疾病相关环形RNA数据库circRNA Disease发布；外泌体中circRNA研究论文2篇，其中一篇与肝癌相关，解读链接：外泌体研究之砷慢性中毒会通过外泌体诱发肝癌；下面我们一起详细了解下另外一篇胰腺癌细胞来源外泌体中circ-PDE8A的作用机制文章。

胰腺导管腺癌（PDAC）是胰腺癌中最常见的一种恶性疾病，5年生存率低于5%，致死率高于其他肿瘤，可谓癌症之王，大多数胰腺癌病人确诊后就是晚期，如何提高PDAC的早期诊断力，一直是癌症研究人员奋斗的方向之一。外泌体和circRNA是最近分子诊断标记物的研究热门，该论文的研究者在高侵袭性的PDAC细胞来源的外泌体中发现circ-PDE8A，并深入探讨了circ-PDE8A在PDAC发生发展中的作用，下面我们一起解读下这篇研究论文的结果。

图：外泌体中的circPDE8A参与PDAC侵袭过程中的作用机制模式图

1、证实PDAC肿瘤外泌体中circ-PDE8A的存在和特征

图1、A：实验研究技术路线，构建Hs766T低转移和Hs766T-L2高转移细胞模型，分离外泌体，提取RNA进行circRNA芯片筛选；B-C：Hs766T-L2高转移性细胞及外泌体中几个circRNA的qRT-PCR验证；D-F：circRNA过表达载体和siRNA及PCR引物设计示意图；

图2、G：BxPC-3细胞中验证circ-PDE8A的过表达和siRNA干扰效率；H-I:过表达circ-PDE8A后Hs766T细胞侵袭能力改变；J-M:qPCR验证circ-PDE8A在胰腺癌细胞Hs766T中表达特性；

2、胰腺癌患者样本中高表达的circ-PDE8A与癌症进展及预后相关

图3、A-C:circ-PDE8A及线性PDE8A基因在胰腺癌细胞和组织样本中的相对表达水平分析；D-F：5对淋巴结转移及非淋巴结转移PDAC患者样本中circ-PDE8A表达水平变化；

图4、G-H：87个PDAC患者中circ-PDE8A及线性PDE8A基因的KM生存曲线分析；

3、circ-PDE8A通过激活MET促进PDAC细胞侵袭

图5、划痕和transwell实验表明过表达circPDE8A显著促进PDAC细胞增殖、迁移和侵袭；

图6、过表达circ-PDE8A后，MET蛋白及相关EMT标志蛋白表达改变显著增高；

4、证实circ-PDE8A可吸附miR-338发挥作用

图7、A-B免疫荧光观测circPDE8A定位细胞质；C:circPDE8与mir-338表达负相关；D-F:S生物信息学和荧光素酶报告基因实验验证circPDE8与mir-338存在互作结合位点；G：RNA免疫共沉淀实验（RIP)验证circPDE8与mir-338互作；

图8、circRNA pull-down实验，分别设计circPDE8A和miR-338的生物素探针，验证是否可以互相拉取对方，足以证明circPDE8A和miR-338的直接相互作用；

5、示踪外泌体与PDAC细胞通讯

图9：外泌体电镜及WB鉴定，Dli标记外泌体和胰腺癌细胞共培养并激光共聚焦显微镜观测；

图10、提取过表达circPDE8A的胰腺癌细胞来源的外泌体与BxPC3、Capan-1细胞共培养后，WB检测AKT通路相关蛋白表达变化，E-F体内实验表明exosmes共培养后的BxPC3细胞可形成原为瘤；

参考文献列表

文 | circRNA 吉赛生物

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