1、循环外泌体miR-27a和miR-130a作为CRC新型潜在诊断生物标志物(Discovery阶段)首先,通过GEO数据集(GSE33961)对术后生存时间长(≥5年)或短(<5年)的CRC患者的miRNA表达进行全面比较分析。在生存时间短的患者中发现了46个上调和5个下调的miRNAs。接下来,进一步在TCGA结肠腺癌[COAD]数据集中验证这些失调的miRNAs。发现只有8个miRNAs显示出一致的结果,与CRC患者预后显著相关。为了研究循环外泌体miRNA的诊断作用,进一步分析了另一个GEO数据集(GSE39833)。发现与CRC患者预后显著相关的8个miRNAs中,只有miR-27a和miR-130a显著失调。GSE39833的数据显示循环外泌体miR-27a和miR-130a是CRC的新型潜在诊断生物标志物。2、miR-27a和miR-130a在CRC早期检测中的表现(Training阶段)接着,对40名I期CRC患者和40名健康受试者进行队列研究,发现I期CRC患者血浆外泌体miR-27a和miR-130a的相对表达显著高于健康对照组。ROC曲线分析表明了血浆外泌体miR-27a和miR-130a在CRC早期检测中的诊断作用。3、在不同分期CRC患者中进行验证(validation阶段)然后,通过qRT-PCR检测40名健康受试者、40名I期CRC患者、20名II期CRC患者、14名III期CRC患者和6名IV期CRC患者中miR-27a和miR-130a的表达。发现CRC患者血浆外泌体miR-27a和miR-130a的相对表达显著高于健康对照组。ROC曲线分析验证了血浆外泌体miR-27a和miR-130a可用于不同分期CRC患者的诊断。4、腺瘤患者的External validation阶段接下来,进行了由50名I期CRC患者、50名腺瘤患者和50名健康受试者组成的更大队列研究。发现CRC患者血浆外泌体miR-27a和miR-130a的相对表达显著高于腺瘤患者和健康对照组。ROC曲线分析结果进一步验证了循环外泌体miR-27a和miR-130a在CRC早期检测中的作用。5、循环外泌体miR-27a和miR-130a是肿瘤衍生的miRNAs为了确定miR-27a和miR-130a是癌细胞分泌进入外周血的分泌miRNAs,对超离心后血浆和培养基样品进行了透射电子显微镜图像(TEM)分析,捕获直径为40-100 nm的圆形微囊泡。然后对收集的15对术前和术后血浆外泌体标本进行qRT-PCR,发现CRC组织切除后循环外泌体miR-27a和miR-130a表达明显下降(图A)。此外,CRC细胞系培养基中的外泌体miR-27a和miR-130a显著更高(图B)。表明了循环外泌体miR-27a和miR-130a来源于肿瘤。6、血浆外泌体miR-27a和miR-130a的高表达与CRC患者预后不良相关最后,本研究评估了循环外泌体miR-27a (miR-130a)与CRC患者临床病理特征的相关性。相关回归分析表明,外泌体miR-27a与TNM分期呈正相关,外泌体miR-130a与TNM分期以及组织学分级呈正相关。此外,使用Kaplan-Meier生存分析进一步分析了CRC患者外泌体miR-27a (miR-130a)表达与临床预后的相关性。结果表明,血浆外泌体miR-27a和miR-130a的高表达是总生存率差的新型潜在预测因子。参考文献:Liu X, Pan B, Sun L, et al. Circulating exosomal miR-27a and miR-130a act as novel diagnostic and prognostic biomarkers of colorectal cancer[J]. Cancer Epidemiology and Prevention Biomarkers, 2018, 27(7): 746-754.来源:锐博生物