3 月 30 日，一项来自深圳市第三人民医院肝病研究所张政等人发表的研究称，目前商用试剂盒检测带来的假阴性可能是导致 “复阳” 的原因。

研究人员分析了于 2020 年 1 月 23 日 – 2 月 25 日出院的 262 例新冠患者患者发现，截至 2020 年 3 月 10 日，所有患者至少随访 14 天，“复阳”患者占比为 14.5%（ 38/262 例）。

此外，他们在使用张锋实验室超灵敏的 SHERLOCK （与神探夏洛克 · 福尔摩斯同名的检测技术）试剂盒检测后发现，目前商业试剂盒检测结果为阴性的 24 个样品中，有 18 个样本呈阳性。这提示已经治愈的新冠肺炎患者仍可能携带新冠病毒。

这个发现为恢复期新冠患者的有效管理提供了关键信息。这项研究发表在了预印本网站 medRxiv。

更灵敏的检测

这项超灵敏的核酸检测技术来自美国麻省理工学院张锋实验室研发，名为 SHERLOCK 试剂盒，而商用试剂盒来自中国食品药品监督管理局（CFDA）批准的商业试剂盒。商业试剂盒的检测下限为 500 拷贝每毫升样品，而 SHERLOCK 试剂盒则为 100 拷贝每毫升。

就在今年 2 月 15 日，美国麻省理工学院发布消息称，张锋实验室开发的核酸检测系统 SHERLOCK 有望在 1 小时内实现新型冠状病毒检测。张锋实验室公布了详细操作流程，并表示可向新冠病毒研究者提供检测套件。

图丨张锋团队 SHERLOCK 检测冠状病毒的论文（来源：bioarxiv）

SHERLOCK 系统基于基因编辑工具 CRISPR-Cas13，DeepTech 曾在 2 月时报道过这一检测方法。SHERLOCK 系统最初曾在多种人类样本（如唾液）中发现寨卡、登革热等病毒的 RNA 序列，甚至一些与癌症突变相关的序列，其对 RNA 和 DNA 的检测灵敏度都达到了单分子级。

为更好地使用 SHERLOCK，张锋团队开发了类似于验孕棒一样的试纸检测方法：不需要任何特殊设备，只需一张试纸，SHERLOCK 系统就能显示出病毒感染检测结果，非常易于使用。

具体到用在新冠病毒的检测中，张锋团队则为其设计了能与新冠病毒特异性结合的 RNA：其中一种 RNA 能识别新冠病毒的 S 基因，另一种 RNA 则识别 Orf1ab 基因。其作用原理是：一旦找到新冠病毒， RNA 上附着的强力剪切酶（Cas13a）就会被释放，切断病毒基因并形成视觉可见的检测结果。因此该技术只需 1 小时就能判断是否存在新冠病毒。

图 | SHERLOCK 试纸检测结果展示（来源：Nature）

武汉大学药学院一位不愿具名的教授告诉 DeepTech，张锋的检测技术虽然使用便捷，但需要防止假阳性。因为在高灵敏的检测技术中，若核酸扩增（PCR）过程不能密闭进行，就容易将核酸污染误读为阳性。

难缠的“复阳”

在上述研究中，截至 3 月 10 日有 38 例 “复阳” 患者出现，占同期随访患者的 14.5%。其特征是，与非 “复阳” 患者相比，“复阳”患者中轻症比例更高。更多的 “复阳” 患者在住院期间仅仅有轻微症状，合并症和发烧较少，但上呼吸道症状多。重症患者并没有发生“复阳”。

“复阳”患者的另一个特点是绝大部分小于 60 岁，且 “复阳” 患者再次入院后无明显病程进展。

科学家通常认为病毒载量高低和疾病结局有关。中度症状的 “复阳” 患者在发病后 2-3 周内检测转为阴性，而非 “复阳” 患者则超过 3 周。作者推测说，中度症状的 “复阳” 患者转阴时间缩短可能影响了适应性免疫的持续性。

“复阳”患者和非 “复阳” 患者的血浆中抗体水平相似。作者称，未来的研究应该调查患者的免疫反应，这些反应常常可决定临床结果。

不过，在这些 “复阳” 患者中，没有发现明显的病情进展或复发的临床证据，包括 CT 显像和实验室检查。这些 “复阳” 患者也无需使用抗生素、类固醇、抗病毒药和吸氧，且其炎症反应明显降低。也就是说，即使检测到患者“复阳”，其病情也不会加重。

为何会出现 “复阳” 患者？许多专家认为可能有多种因素相关，检测技术导致的假阴性只是因素之一。

间歇性病毒释放和病毒分布也是主要的病毒学因素。比如新冠病毒在消化道和粪便中可能长时间存留，这也是深圳市第三人民医院自 2020 年 2 月 22 日起将肛拭子检测阴性纳入出院评估标准的原因。然而作者指出，这并不能显著减少患者 “复阳” 的发生。

武汉大学人民医院检验科主任李艳在接受 DeepTech 采访时表示，取样部位可能会影响到病毒检测。她更认可鼻拭子取样，因为咽拭子取样的时候，可能会遇到口水或刮到舌头，这都可能让取样不准确。

更重要的是，这些 “复阳” 患者出院后未引起新的感染。21 例与 “复阳” 患者密切接触者的新冠病毒核酸检测均为阴性，未见可疑临床症状。

如何防“复阳”

除了武汉和广东，四川、湖北、湖南、天津、陕西多地相继有 “复阳” 患者的报道。

据 3 月 3 日颁发的《新型冠状病毒肺炎诊疗方案（试行第七版）》，患者出院需满足如下标准：痰、鼻咽拭子等连续两次呼吸道标本核酸检测阴性（采样时间至少间隔 24 小时），体温恢复正常三天以上，呼吸道症状明显好转，肺部影像学显示急性渗出性病变明显吸收好转。而深圳市第三人民医院还将肛拭子检测阴性纳入出院评估标准。

3 月 22 日，湖北省卫健委副主任涂远超接受湖北日报采访时称，对于在复诊中发现核酸检测 “复阳” 病例，有症状的患者由接诊医疗机构通知“120”，将患者转运至现有定点医院进行治疗，再次达到出院标准后予以出院，并进行 2 周隔离康复观察；对于无症状的患者，由接诊医疗机构通知所在社区，由社区将患者转运至有关集中隔离康复点，进行 2 周集中隔离康复观察，达到解除隔离标准后解除隔离。

“复阳”患者在首次确诊时，已按照国家相关要求纳入确诊病例上报，因此复诊时不再作为新增确诊病例重复上报。

涂远超表示，根据国家卫生健康委医政医管局对 “复阳” 患者监测情况及专家初步研究来看，目前暂未发现 “复阳” 患者传染人的现象。

据《新型冠状病毒肺炎诊疗方案（试行第七版）》，在出院后注意事项中指出，鉴于有少数出院患者出现核酸检测复检阳性的问题，将此前版本的 “应继续进行 14 天自我健康状况监测” 改为“应继续进行 14 天的隔离管理和健康状况监测”，同时要求佩戴口罩，有条件的居住在通风良好的单人房间，减少与家人的近距离密切接触，分餐饮食，做好手部卫生，避免外出活动。

那么，更灵敏的核酸检测技术有没有必要普及呢？李艳说，尽管张锋的检测技术更灵敏，但因其没有商业化只能用于科研，而无法用于临床检测。在临床实践中，可以用抗体检测来弥补核酸检测假阴性的漏洞。

上述不愿具名的武大教授认为，更高灵敏的检测技术可以作为商用试剂盒检测技术的补充，尤其是对于有症状患者屡次测试为阴性的情况下，可以用作对比测试。

来源：麻省理工科技评论