什么是riboEDIT™ CRISPR-Cas9体系？
该体系为锐博生物自主开发的CRISPR-Cas9体系（锐博专利号：108977442A），采用天然复合物系统（crRNA和tracrRNA）进行基因编辑，包括Cas9 mRNA的全RNA体系和基于Cas9蛋白的RNP体系，tracrRNA可实现大规模合成，靶向DNA目的序列的crRNA可以高通量合成，针对哺乳动物细胞可简单通过化学转染或电转方式进行基因编辑实验。
riboEDIT™ CRISPR-Cas9体系为即用型，不需要自行构建gRNA表达载体，无需在病毒级实验室中操作，无DNA组分，并且可实现多个crRNA指导下的多靶点编辑，大大简化前期实验准备与操作步骤，更适合于高通量细胞水平的基因敲除筛选，还提供具有编辑效率保证的CRISPR-Cas9套装产品，提供方便、省时、可靠和高效的解决方案。
riboEDIT™ CRISPR-Cas9体系优势
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锐博专利技术：优化的crRNA、tracrRNA和Cas9 mRNA
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即用型体系，更加易用，适合从小规模到大规模高通量筛选
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无需病毒级实验室，大大降低基因编辑对实验环境的要求
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此外，riboEDIT™ CRIPSR-Cas9体系相比于质粒载体表达Cas9和Cas9稳定表达细胞株或慢病毒系统的优势显著。
首先，riboEDIT™ CRIPSR-Cas9的全RNA体系或Cas9蛋白体系相比质粒载体或Cas9稳定表达细胞株而言，Cas9蛋白为瞬时表达，脱靶效率低、无DNA整合风险和启动子兼容性问题，大大提高应用安全性。然后，它是即用型体系，通过一步转染，5-6个工作日即可完成编辑效率检测，操作简便，显著缩短实验周期。其次，不需要自行构建载体或包装慢病毒，不需要病毒级的实验室环境。再次，在大部分细胞中，比质粒表达载体具体更高的基因编辑效率。
riboEDIT™ CRISPR-Cas9具有高效的基因编辑效率
Fig.1 MHCC97H细胞共转染10pmol riboEDIT™ crRNA、10pmol riboEDIT™ tracrRNA和1ug riboEDIT™ Cas9 mRNA，48小时后 riboEDIT™ T7EI Enzyme酶切检测靶位点的剪切效率，候选7个靶基因的剪切条带及编辑效率。如图所示，#1#2表示同一基因不同位点设计的2条crRNA。
Fig.2 MHCC97H细胞共转染6pmol riboEDIT™ crRNA、6pmol riboEDIT™ tracrRNA和6pmol riboEDIT™ Cas9 Protein，48小时后 riboEDIT™ T7EI Enzyme酶切检测靶位点的剪切效率，候选7个靶基因的剪切条带及编辑效率。如图所示，#1#2表示同一基因不同位点设计的2条crRNA。
Fig.3 riboEDIT™ CRISPR-Cas9 mRNA基因编辑体系与riboEDIT™ Cas9 RNP复合物具有等同的靶位点编辑效率。
riboEDIT™ CRIPSR-Cas9编辑效率保证套装和标准套装
锐博生物提供方便高效的效率保证套装和标准套装。效率保证套装针对人源基因，利用设计软件挑选评分高的5条crRNA进行合成，基于Cas9 mRNA的体系配置必备试剂，包括tracrRNA、Cas9 mRNA、mRNA转染试剂、阳性对照crRNA套装、T7E1酶及配套缓冲液等，提供即用型的基因编辑工具。其中效率保证套装可以确保MHCC97H细胞的T7E1酶切效率至少1条达到30%以上并提供相应的售后服务，标准套装不提供任何编辑效率的保证。
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riboEDIT™ CRISPR-Cas9 mRNA Set, 20T
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◾ riboEDIT™ Designed crRNA（设计合成5条crRNA）5*5nmol
◾ riboEDIT™ tracrRNA, 5nmol
◾ riboEDIT™ Positive Control crRNA Validation Set for Human, 1 set
◾ riboEDIT™ mRNA Transfection Reagent 75ul
◾ riboEDIT™ Cas9 mRNA (0.5ug/ul), 20ug
◾ riboEDIT™ T7EI Enzyme (10U/ul) , 100U
◾ 配套还有缓冲液和无RNA酶水
riboEDIT™ Designed crRNA采用锐博生物优化的生物信息学设计，客户无需具备crRNA/sgRNA设计经验，crRNA包含20个与目标DNA序列互补配对的核苷酸（原间隔序列）和与tracrRNA互补配对的重复序列,涵盖人类和小鼠基因，每个基因设计合成3 - 6段单独的sgRNA，其他物种crRNA设计需另行评估。
crRNA阳性对照套装用于检测基因剪切体系的正确性，该套装包括阳性对照crRNA、正向引物和反向引物。
化学合成的tracrRNA经HPLC纯化，能够抗核酸酶，能与crRNA结合形成crRNA/tracrRNA复合物，共同指导Cas9蛋白切割双链DNA。
riboEDIT™ Cas9 mRNA为体外转录生成，具有帽子和polyA尾巴结构，编码载体为人源密码子优化的S. pyogenes Cas9，带有核定位信号（NLS），C端的一个1XFLAG标签，5’非翻译区(5’UTR)及3’非翻译区(3’UTR)，以促进mRNA的翻译和提高mRNA的稳定性，适用于哺乳动物细胞基因编辑。
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